Muestras rápidas del exudado de la lesión del suero de Kit Real Time For Human de la prueba de la polimerización en cadena del virus de Monkeypox

Especificación

PROCEDIMIENTOS

1. Preparaciones de la muestra
La extracción de la DNA de muestras clínicas se conduce según los requisitos y los procedimientos correspondientes en el equipo de la extracción de la DNA del virus. Extraído

La DNA se puede utilizar directamente para la detección. Si la muestra no se detecta inmediatamente después de la extracción, debe ser almacenada en -70°C para el recurso seguro, evitando ciclos hielo-deshielo repetidos.

2. Preparación del sistema de reacción
(1) preparación del sistema: Saque el reactivo del equipo, y permita que deshiele totalmente en la temperatura ambiente. Invierta la mezcla y la centrifugadora inmediatamente. Reacciones de la prueba de N (N = el número de muestras que se probarán + control positivo + control negativo + 1) se preparan para los sistemas de reacción, respectivamente, como sigue.

(2) distribución de sistema de reacción: Mezcle bien el almacenador intermediario antedicho de la reacción, centrifugadora, y dispense 15μL de partes alícuotas en los tubos de la polimerización en cadena convenientes para el instrumento fluorescente de la polimerización en cadena. (Centrifugue los tubos de la polimerización en cadena en 6,000rpm para que 30s y el transporte muestreen zona del tratamiento.)

3. Cargamento de la muestra (zona del tratamiento de la muestra)
Añada la muestra ácida nucléica 10μL, el control negativo y el control positivo a los tubos antedichos de la polimerización en cadena respectivamente. Capsule los tubos firmemente y la centrifugadora en 6,000rpm para 10s y entonces el transporte a la zona de la amplificación de la polimerización en cadena.
* precaución: El adición de muestras en el orden siguiente es
recomendó: muestra ácida nucléica del control-> negativo - > control positivo.
 

4. Amplificación de la polimerización en cadena (zona de la amplificación de la polimerización en cadena)
4,1 ponga los tubos caped de la polimerización en cadena en la máquina en tiempo real de la polimerización en cadena para la amplificación.
4,2 ajuste de la condición del ciclo de la polimerización en cadena de la fluorescencia

Recoja las señales fluorescentes en el ℃ del 3:60 del paso; 35s para ABI 7500, 20s para SLAN-96S/96P, mientras que 13s para otros sistemas en tiempo real de la polimerización en cadena. El volumen total: 25μL.

4,3 disposición después de la detección
Disponga los tubos de la polimerización en cadena en un bolso sellado después de la reacción y trate los tubos usados como basuras médicas.
 

5. Ajustes para el análisis del resultado
Fije la línea de fondo en una región antes de la amplificación exponencial donde están relativamente estables las señales fluorescentes de todas las muestras (ningunas fluctuaciones significativas en todas las muestras); fije el punto inicial (número de ciclo) lejos de las fluctuaciones de la señal en comenzar
fase de colección de la fluorescencia; fije la punto final (número de ciclo) 1~3 ciclos antes del Ct de la primera muestra para incorporar la amplificación exponencial. se recomiendan 4~15 ciclos.
Fije la derecha del umbral sobre el punto más alto de la curva negativa de la amplificación del control (curva irregular del ruido).
 

6. Criterios del control de calidad
Antes de evaluar los resultados del espécimen, el control positivo y el control negativo se deben interpretar usando la tabla de la interpretación abajo, y el control positivo y la curva negativa del control se deben realizar correctamente, si no el resultado de la muestra es inválido.

7. Interpretación de los resultados de la prueba
Los canales para el virus de Monkeypox, resultado de FAM de la detección se deben interpretar como abajo.
a) positivo: S-se forma el ≤ 38 del Ct y la curva de la amplificación.
b) sospechó: 38 < Ct=""> 40 o ≤ nulo 35 del Ct y del Ct en el canal de VIC para la segunda prueba.
c) negativa: Ct > 40 o ≤ nulo 35 del Ct y del Ct en el canal de VIC.
d) contra-prueba: Ct > 40 o Ct nulo y Ct > 35 en el canal de VIC.